Vortexing RNA شما را برش نمی دهد تا غیرقابل استفاده شود اگر RT پرایمینگ تصادفی انجام می دهید - فقط اگر می خواهید mRNA طولانی را شبیه سازی کنید. پشتیبانی فنی Invitrogen نیز درست است. کلروفرم سنگین‌تر از تریزول است و در انتهای لوله فرو می‌رود.
آیا چرخاندن RNA بی خطر است؟
برای جلوگیری از برش، لیزهای Trizol یا نمونه های RNA را ورتکس نکنید. پس از استخراج، نمونه های RNA را همیشه روی یخ نگه دارید. این پروتکل برای نمونه های لیز شده 1 میلی لیتر تریزول در یک لوله 1.5 یا 2 میلی لیتری طراحی شده است.
آیا می توانید RNA را گرم کنید؟
بنابراین، از دماهای بالا ( بالاتر از +65°C) خودداری کنید زیرا اینها بر یکپارچگی RNA تأثیر می گذارد. در عوض، برای ذوب کردن ساختارهای ثانویه، RNA را تا 65+ درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه در حضور بافرهای دناتوره کننده حرارت دهید.
چگونه گلوله های RNA را دوباره معلق می کنید؟
گلوله خود را مجدداً با آب گرم (40-50 درجه سلسیوس) معلق کنید. در دمای 45 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه انکوبه کنید. آنها را در +4 برای 4-6 ساعت قرار دهید.
چگونه RNA را رسوب می کنید؟
A.
بعد از تنظیم غلظت نمک، RNA ممکن است با اضافه کردن 2.5 حجم اتانول یا 1 حجم ایزوپروپانول و مخلوط کردن کامل، رسوب داده شود. پس از آن حداقل 15 دقیقه در دمای -20 درجه سانتیگراد سرد کنید.
