چگونه ایمونوفلورسانس انجام دهیم؟

2024 نویسنده: Fiona Howard | [email protected]. آخرین اصلاح شده: 2024-01-10 06:36

در زیر مروری بر مراحل مختلف پروتکل رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس غیرمستقیم است

1. برنامه ریزی آزمایش و آماده سازی نمونه. …
2. تثبیت نمونه. …
3. نفوذ سلولی. …
4. مسدود کردن. …
5. جوجه کشی اولیه آنتی بادی. …
6. انکوباسیون آنتی بادی ثانویه. …
7. Counterstain and Mounting.

چگونه ایمونوفلورسانس را انجام می دهید؟

همه مراحل جوجه کشی در دمای اتاق انجام می شود

1. سلول ها را دوبار بشویید و با استفاده از موچین ورقه های روکش را با سلول های رو به بالا در محفظه مرطوب قرار دهید.
2. با فرمالدئید 4 درصد به مدت 10 دقیقه ثابت کنید و 3× را بشویید.
3. قابلیت نفوذپذیری با 0.1% TX-100/PBS به مدت 15 تا 20 دقیقه و شستن 3×.

چگونه از ایمونوفلورسانس در یک سلول استفاده می کنید؟

پروتکل ایمونوفلورسانس برای سلولهای چسبنده

1. بذر 1-1.5 x10⁴ سلول در هر چاه یک اسلاید 4 محفظه ای در 500 میلی لیتر محیط کشت. جوجه کشی در دمای 37 درجه سانتی گراد در 5% CO_2.
2. 32-36 ساعت پس از کاشت سلول، محیط کشت سلولی را بردارید و سلول ها را 3 بار با استفاده از 500 میکرولیتر 1X PBS شستشو دهید.

نمونه ای از ایمونوفلورسانس چیست؟

برای مثال، یک محقق ممکن است آنتی بادی های اولیه را در یک بزایجاد کند که چندین آنتی ژن را شناسایی کند، و سپس از آنتی بادی های ثانویه خرگوش همراه با رنگ استفاده کند که ناحیه ثابت آنتی بادی بز را تشخیص می دهد ( آنتی بادی های خرگوش ضد بز).

کاربرد رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس چیست؟

رنگ‌آمیزی ایمونوفلورسانس (IF) یک تکنیک پرکاربرد در تحقیقات بیولوژیکی و تشخیص‌های بالینی است. به دنبال تصویربرداری، این یک تکنیک بسیار مستقیم است زیرا شما واقعاً می توانید چیزی را ببینید.