سنجش مکمل فلورسانس دومولکولی (BiFC) روشی است که برای تجسم مستقیم تعامل پروتئین-پروتئین در داخل بدن با استفاده از تصویربرداری سلول زنده یا سلول های ثابتاستفاده می شود. … BiFC اولین بار توسط Hu و همکاران توصیف شد.
چگونه مکمل فلورسانس دو مولکولی کار می کند؟
اصل کار BiFC بر اساس ایجاد یک کمپلکس فلورسنت است، در نتیجه ارتباط دو بخش از یک پروتئین فلورسنت زمانی که آنها در مجاورت نزدیک به دلیل برهمکنش پروتئین-پروتئین در قطعات هستند، به عنوان مثال. ، در BiFC، یک فلوروفور به انتهای انتهایی آمینو و کربوکسیل تقسیم می شود.
تست BiFC چیست؟
سنجش
مکمل فلورسانس دو مولکولی (BiFC) تجسم ساده و مستقیم فعل و انفعالات پروتئین در سلول های زنده را امکان پذیر می کند (45).رویکرد BiFC بر پایه تشکیل یک کمپلکس فلورسنت است که دو پروتئین ذوب شده به قطعات غیر فلورسنت پروتئین فلورسنت با یکدیگر تعامل دارند (شکل
چرا آزمایش BiFC انجام می شود؟
ایده BiFC برای بیان نیمی از GFP است که با پروتئین های مورد علاقه شما ترکیب شده است اگر POI ها با هم تعامل دارند، می توانید هر دو نیمه را با هم جمع کنید تا یک GFP عملکردی به دست آورید. بنابراین اگر نیمی از GFP در سلول بیان شود، من تعجب نمی کنم که یک آنتی بادی GFP بتواند آن را تشخیص دهد.
آیا BiFC برگشت پذیر است؟
برگشت ناپذیری کمپلکس های BiFC به خوبی ثبت شده است (10)، و به نظر می رسد که اکثر، اگر نه همه، سیستم های مبتنی بر پروتئین فلورسنت ، برگشت ناپذیر هستند (8, 33، 43، 48-51).
